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丢了肥膘的猪
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吴山脚下2012

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郑承纲 李宗田 张汝生(中国石化石油勘探开发研究院,北京 100081)摘 要 针对中低温油藏压裂破胶施工的需求,筛选出生物破胶酶生产菌株——地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BG1,通过两水平试验设计确定了该菌株产酶培养基中的显著因素(碳源、有机氮源和无机氮源),在此基础上,又通过中心法则试验设计对该菌株的产酶培养基组成做进一步优化,最终确定了发酵培养基组成为08g/L碳源,74g/L有机氮源,22g/L无机氮源,2g/L磷源,0g/L硫源,05g/L微量元素。采用该优化培养基,BG1菌株的生物破胶酶产量达239 U/L。该菌株所产生物破胶酶拥有良好的稳定性,在低于50℃中温浴6h,酶活力保持率可达85%以上,同时该酶对非极端pH条件、常规地层离子和化学助剂亦表现出良好的稳定性。通过对该酶破胶性能进行研究,发现该酶在中、低温环境下破胶效果好,30 ~60℃温度下破胶后的压裂液黏度分别为1cp、23cP、97cP和65cP,破胶返排后地层伤害小,模拟实验伤害率仅为37%,体现了该生物破胶酶在中、低温油藏压裂施工中的良好应用前景。关键词 地衣芽孢杆菌 生物破胶酶 中低温油藏 稳定性 破胶效能Production of Enzymatic Gel Breaker and ItsGel Breaking Potential EvaluationZHENG Chenggang,LI Zongtian,ZHANG Rusheng(Exploration and Production Research Institute,SINOPEC,Beijing 100081,China)Abstract In order to fill the fracturing gel breaking demand in those moderate-/low-temperature reservoirs, Bacillus licheniformis BG1 was selected for the production of enzymatic gel breaker(EGB)The significant variables in the EGB fermentation medium were identified as carbon source,organic nitrogen and inorganic nitrogen source by two-level factorial design and were further optimized through full-factorial central composite The optimal composition of EGB fermentation medium was 08 g/L carbon source,74 g/L organic nitrogen,22 g/L inorganic nitrogen,2 g/L phosphorus source,0 g/L sulfur source,05 g/L trace elements and the maximum EGB production yield was 239U/LThe EGB produced by Blicheniformis BG1 exhibited good thermostability that after incubation at a temperature below 50 ℃for 6 h,the residual activity was still above 85% retention The enzymatic breaker also showed a good stability withthe non-extreme pH conditions,conventional ion formation and chemical The viscosities of broken fracturing fluids were 1 cP,23 cP,97 cP and 65 cP at a temperature ranging from 30℃ to 60℃,EGB operation caused little damage to the formation that the damage rate was merely 37% in the physical simulation Based on the results from this work,the enzymatic gel breaker presents a good prospect in the hydraulic Key words Bacillus licheniformis;enzymatic gel breaker;moderate-/low-temperature reservoirs; stability;gel breaking efficiency水力压裂是油气井增产、注水井增注的一项重要技术措施,全国压裂措施工艺每年达上万井次,年增油近千万吨。其过程是用压裂泵组将压裂液以高压力压开地层,形成裂缝;并用支撑剂支撑裂缝,增加导流能力、减小流动阻力,是一种增产、增注措施。压裂液的性能是影响压裂施工成败的关键因素,压裂液的破胶效果直接影响压裂液的反排和增产效果,破胶失败或者不理想会造成严重的地层伤害。根据低渗透储层的特点,利用核磁共振技术及岩心流动试验进行了压裂液伤害机理研究,结果表明:压裂液黏滞力和大分子基团滞留是造成伤害的主要因素。因而提高破胶效果,降低压裂液的黏滞阻力,是解决压裂液伤害的一个重要办法[1,2]。大多数水基压裂液所使用的稠化剂为(变性)胍豆胶,压裂作业中常用化学(氧化型)破胶剂为过硫酸钾、过硫酸铵等,其优点是价格低、使用方便、破胶迅速、破胶液黏度在10mPa·s以下。但在实际应用中,氧化破胶剂存在着一些缺陷,包括:(1)反应时间及其活性主要依赖于温度,温度低于50℃时,反应很慢,必须添加低温催化剂,而高于93℃时降解反应发生很快,反应不易控制,反应迅速,使压裂液提前降解而失去输送支撑剂的能力,甚至导致压裂施工失败;(2)它属于非特殊性反应物,能和遇到的任何反应物如管材、地层基质和烃类等发生反应,易生成与地层不配伍的污染物,造成地层伤害;(3)作用时间短,氧化型破胶剂往往在到达目的裂缝前消耗殆尽,达不到有效破胶的目的;(4)反应不彻底,造成胍豆胶不能完全降解,约20%的分子量大于0×106的聚合物基本上未降解,并产生大量残渣。而生物破胶酶是具有高催化能力和很好活性的生物蛋白,它在催化反应时自身的形态和结构不发生改变,其反应特异性决定了其专一性分解多糖聚合物结构中特定的糖苷键,并将其降解为单糖和二糖,这些特异性的生物破胶酶主要有Beta-1,4甘露聚糖酶、Beta-甘露糖苷酶和Alpha-半乳糖苷酶等。研究表明,化学破胶剂破胶后的聚合物分子量为(0~0)×105Da,而生物酶破胶方法后的胶液分子量仅为2000~4000Da,其破胶性能大大高于氧化型破胶剂,压裂后无残渣,返排效果好[3]。同时,生物破胶酶主要应用于30~60℃的油藏,有效弥补化学破胶剂在中、低温油藏应用中的瓶颈问题(如反应缓慢、需要添加催化剂、破胶难以控制)[4~6]。本文对新型压裂液生物破胶酶进行了研究,优化了其发酵生产条件,并对其破胶性能进行了相关分析。1 生物破胶酶的发酵生产和纯化1 菌种、培养基和发酵条件本研究中所用生物破胶酶生产菌株为本实验所保存菌种BG1,分离自某油田原油污染土样,经16SrDNA序列分析和生理生化反应鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),菌株保存于-80℃冰箱甘油管(20%,v/v)中,使用前经固体培养基进行活化后作为接种物。种子液培养采用LB培养基,其组成为:10g/L蛋白胨,5g/L酵母膏,10g/L氯化钠,pH=0~2;经响应面法优化后的发酵培养基组成为:08g/L碳源,74g/L有机氮源,22g/L无机氮源,2g/L磷源,0g/L硫源,05g/L微量元素。接种浓度为0%,接种后的培养物置于37℃摇床中在转速180rpm条件下培养48h。2 酶活力的测定本研究中破胶酶的酶活力检测采用3,5-二硝基水杨酸法(DNS法),分别以0mg/mL、2mg/mL、4mg/mL、6mg/mL、8mg/mL和10mg/mL浓度的还原糖溶液作为反应物制作标准曲线。将发酵结束后的菌液于4℃下转速为8000rpm离心10min,去除菌体,取上清液作为粗酶液,以6%浓度胍豆胶溶液作为底物进行水解反应,反应条件为50℃温浴中反应10min,检测反应物中还原糖的浓度。1个酶活力单位(U)定义为:在50℃温浴条件下,每分钟释放1μmol还原糖所需要的酶量[7]。3 破胶酶发酵生产的优化为了获得高产量的生物破胶酶,在菌株最佳培养的基础上,对发酵培养基组成进行优化。首先将破胶酶发酵生产中的碳源、有机氮源、无机氮源、磷源、硫源和微量元素,作为培养基优化实验中的6个试验因素(X1—X6),通过两水平试验设计(Two-level factorial design)筛选其中的显著因素,进而对显著因素的浓度进行进一步优化。本实验中,因素的两水平包括正效应(+)和负效应(-),正效应的因素均取高值,负效应的因素均取低值,通过使因素同时朝响应值增大的方向变化,找出峰值,从而确定逼近最大响应区域的水平值,并把对响应值影响较大的因素(F<05,置信度95%)作为显著因素[8]。两水平试验设计及其响应值如表1所示,通过对实验结果进行分析发现,对破胶酶的生产有显著影响的因素为碳源(90%)、有机氮源(51%)和无机氮源(11%),而磷源(52%)、硫源(27%)和微量元素(11%)对发酵液酶产量影响较小。6个试验因素中,碳源、有机氮源、无机氮源和磷源对破胶酶的发酵生产均呈现负效应,而硫源和微量元素对破胶酶的合成呈现正效应。将碳源、有机氮源和无机氮源3个显著因素分别作为自变量(A、B和C),采用中心法则试验设计(central composite design)对影响破胶酶发酵生产的底物浓度水平进行优化。中心法则试验设计共包括20组实验,其中交互试验23组、中心点6组和边际点6组,每一自变量的5个试验水平分别以-68、-1 、0、+1和+68进行编码[9],如表2所示。表1 两水平试验设计及其响应值(n=6)续表表2 中心法则试验设计及其响应值通过拟合得到一个描述响应值与自变量关系的多元回归模型,如公式(1)所示。模型的P-value值为0041,该值远远小于05,表明回归方程的F检验显著,所获得的模型能够准确地反映破胶酶的发酵生产情况。油气成藏理论与勘探开发技术(五)由响应面回归分析和回归方程拟合绘制酶产量与碳源、有机氮源和无机氮源的响应面,如图1所示。图1 碳源、有机氮源和无机氮源对破胶酶产量影响的响应面通过该模型计算出响应值(酶产量)对因素A、B、C存在极值点,对Y进行极值分析,确定3个因子最优试验点(A、B、C)的代码值(57、25、41),即碳源浓度为08g/L,有机氮源和无机氮源浓度分别为74g/L和22g/L时,该模型预测的破胶酶产量存在极大值,通过实验验证实际酶产量为239U/mL。4 破胶酶的分离、纯化和保存破胶酶发酵结束后,将发酵液在转速5000~10000rpm情况下离心30min去除菌体,并用22μm滤除去残余菌体和不溶物质,将获得的粗酶液经琼脂糖层析柱(20mm×250mm)洗脱:层析柱以pH=3的Tris-HCl缓冲液平衡后以5~5mol的NaCl溶液进行梯度洗脱,洗脱速率为5~15mL/h,收集酶液并用饱和硫酸铵溶液沉淀,将获得的破胶酶由缓冲液稀释至200~400U/mL后低温保存[10]。用于压裂液破胶酶保存的缓冲液组成为:1M的pH=2的磷酸缓冲液,杀菌剂50×10-6,甘油50%。2 生物破胶酶稳定性研究由于生物破胶酶使用过程中要面临油藏复杂的物理化学条件,同时其破胶活性还会受到压裂液体系中其他助剂的影响,因此,本研究中考察了各种物理化学因素(温度、pH、地层离子和化学助剂等)对生物破胶酶活力的影响。1 温度和pH因素对酶活力保持率的影响首先,研究温度和pH因素对生物酶活力保持情况的影响,酶活力保持率如图2所示,实验结果表明:生物破胶酶在中低温条件下有良好的热稳定性,在低于50℃的环境中温浴6h后,其酶活力保持率能达到85%以上,而超过50℃后,酶活力保持率随温度升高开始下降,70℃时,温浴后的酶活力仅为初始值的35%;生物破胶酶在非极端pH环境中(pH =0~0)能较好地维持其活性,而超出这一pH值范围后,酶活力保持率会迅速下降。图2 温度和pH因素对酶活力保持率的影响2 地层离子和化学助剂对酶活力保持率的影响本文还对地层离子和化学助剂对生物酶活力保持情况的影响进行了研究,如表3所示。实验结果表明:地层水中的主要无机离子对破胶酶活力无明显影响;而压裂体系中的常规助剂对酶活力的保持有一定影响,本实验中,生物破胶酶在含有EDTA、杀菌剂和交联剂的溶液中温浴6h后,酶活力的保持率分别为81%、76%和94%。现场的压裂液体系非常复杂,因此,在实际应用中,有必要对各种助剂组分对生物酶活性的影响进行预实验。表3 地层离子和化学助剂对酶活力保持率的影响3 生物破胶酶的破胶性能研究1 生物酶破胶降黏性能研究针对中、低温储层的特点,本实验中所使用的压裂液配方为35%羟丙基胍胶、6%交联剂(0%硼砂溶液)、0%黏土稳定剂、5%杀菌剂,pH =5,生物破胶酶的添加浓度为20U/L。本文研究了不同温度下(20~80℃)的破胶效果,压裂液的降黏效果如图3所示,在40℃和50℃下反应10h后,破胶后的胶液黏度仅为23cP和97cP,而在30℃和60℃时,破胶后的胶液黏度分别为1cP和65cP。在破胶反应30min时,压裂液尚保持较高的黏度,维持了较好的携砂能力。可见,本研究中的生物破胶酶,完全可以满足中、低温油藏压裂施工的作业要求。2 物理模拟破胶岩心伤害实验当压裂液返排时,由于破胶不彻底往往留下很多残渣(固体不溶物),降低裂缝的导流能力。在室内应用物理模拟实验,制作人工胶结岩心模型(10cm×5cm)模拟水力压裂伤害过程,50℃恒温箱中,驱替人工配制的模拟地层水并计算模型的原始渗透率;将模型饱和含有20U/L破胶酶的压裂液液,关闭驱替系统,并在恒温箱中进行破胶反应12h;反应结束后,以模拟地层水进行反向驱替,计算返排后的模型渗透率(驱替至压力恒定),并以未添加破胶酶(APS破胶)的实验组作为对照模拟地层伤害实验,并计算伤害率[11]。图3 不同温度下破胶酶的破胶效果表4 地层伤害实验从表4的结果不难看出,相比空白对照,生物破胶酶的加入可以有效实现压裂液破胶降黏,由于生物酶的破胶作用彻底,实验岩心并未观察到显著的地层伤害(伤害率仅为37%),远低于对照组67%的伤害率,体现了生物酶破胶剂在中、低温油藏压裂施工作业中的良好应用前景。4 结论本研究采用响应面优化法获得了影响地衣芽孢杆菌BG1菌株发酵生产生物破胶酶的培养基组成中的显著因素,并通过建立多项数学模型,采用统计分析对模型进行显著性检验来优化发酵培养基。优化得到的最佳培养基组成为:08g/L碳源,74g/L有机氮源,22g/L无机氮源,2g/L磷源,0g/L硫源,05g/L微量元素。在优化的条件下,地衣芽孢杆菌BG1菌株的生物破胶酶活力达239U/L,表明采用响应面法优化发酵培养基组成是提高菌株产酶活性的有效途径之一,从而为该技术的推广奠定了较好的基础。该菌株产生的生物酶具有良好的稳定性,能够较好地耐受中低温和非极端pH环境,并较好耐受各种无机离子和化学助剂。通过对其破胶性能进行研究,发现该破胶酶能够有效降低压裂液黏度,破胶彻底,对地层伤害小,因此,本研究的研究成果在中、低温油藏压裂施工作业中有着良好的应用前景。致谢 本研究工作是在中国石化前瞻性项目 “微生物降解压裂残渣和重烃研究” 资助下完成的。在研究中,李宗田教授,中国石化石油勘探开发研究院采油工程研究所苏建政所长和苏长明高级专家都给予了宝贵的指导和建议,对他们表示衷心的感谢。参考文献[1]王维明VES-18清洁压裂液性能试验与应用[J]煤田地质与勘探,2010,38(3):24~[2]周继春,叶仲斌,赖南君低温低渗气藏酸基新型压裂液增稠剂的研制[J]西南石油大学学报(自然科学版),2009,31(4):131 ~[3]胡凯,易绍金,邓勇生物酶破胶剂的现状及展望[J]科技咨询导报,2007,21:[4]龙增伟,杨振周,陈凯,等吉林两井地区低残渣缔合压裂液的研究与应用[J]钻井液与完井液,2009,26(3):56~[5]Reiniche A,Rybacki E,Stanchits S,et Hydraulic fracturing stimulation techniques and formation damage mechanism-Implications from laboratory testing of tight sandstone -proppant systems[J]Chemie der Erde,2010,70(53):107~[6]Rahman M K,Suarez Y A,Chen Z,et Unsuccessful hydraulic fracturing cases in Australia: Investigation into causes of failures and their remedies[J]Journal of Petroleum Science and Engineering,2007,57(70):70~[7]Duffaud G D,McCutchen C M,Leduc P,et Purification and characterization of extremely thermostable beta-mannanase,beta-mannosidase,and alpha-galactosidase from the hyperthermophilic eubacterium Thermotoga neapolitana 5068[J]Applied and Environmental Microbiology,1997,63(1):169 ~[8]Gu X,Zheng Z,Yu H,et Optimization of medium constituents for a novel lipopeptide production by Bacillus subtilis MO-01 by a response surface method[J]Process Biochemistry,2005,40:3196~[9]Joshi S,Yadav S,Desai AApplication of response-surface methodology to evaluate the optimum medium components for the enhanced production of lichenysin by Bacillus licheniformis R2[J]Biochemical Engineering Journal,2008,41:122~[10]Tamaru Y,Araki T,Amagoi H,et Purification and characterization of an extracellular beta-1 ,4 - Mannanase from a Marine Bacterium,Vibrio Strain MA - 138[J]Applied and Environmental Microbiology,1995,61(12):4454~[11]徐兵威,王世彬,郭建春,等低伤害压裂液体系伤害性研究与应用[J]钻采工艺,2010,33(4):87~
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贪吃的大吃货

赵金洲简历  赵金洲,男,汉族,1962年10月生,湖北仙桃人,教授 博士生导师,现任西南石油大学副校长。赵金洲同志长期从事石油与天然气工程领域的教学科研工作,是我国知名的采油气工程专家和著名的压裂酸化专家。  赵金洲,男,汉族,中共党员,教授,博士生导师。1962年10月生,湖北仙桃人,1985年毕业于西南石油大 学,获硕士学位。现任西南石油大学副校长、教授、博士生导师。主要从事石油与天然气工程、油气储运工程和信息系统与计算技术的研究,获省部级以上成果奖励16项,撰写和参加撰写专著、手册7部,发表论文200多篇,被SCI、EI、ISTP收录116篇。  兼任中国能源学会副理事长、教育部教学指导委员会委员、四川省机械工程学会副理事长、四川省矿物岩石地球化学学会副理事长、成都市科技青年联合会主席、四川省决策咨询委员会委员、四川省科技顾问团顾问、四川省引进国外智力专家咨询委员会委员、《油气地质与采收率》理事会副理事长、《钻采工艺》编委会副主任,《油气地质与采收率》、《石油钻采工艺》、《石油钻探技术》、《钻采工艺》、《断块油气田》、《西南石油大学学报》、《内燃机学报》等刊物编委,兼任教育部天然气开发工程研究中心主任、低渗透油气田勘探开发国家工程实验室理事会理事和学术委员会委员、国家“川气东送”工程专家组成员,是四川省有突出贡献优秀专家、中国石油天然气集团公司跨世纪学术技术带头人、享受国务院政府特殊津贴、四川省学术技术带头人、新世纪百千万人才工程国家级人选、四川省院士培养工程培养对象,曾被授予四川省十大杰出青年称号。  个人简历  09-07 西南石油学院开发系采油工程专业  09-07 西南石油学院开发系油气田开发工程专业,硕士  07-09 西南石油学院采油教研室秘书、副主任、主任  09-06 西南石油学院石油工程系副主任  06-04 西南石油学院教务处副处长,博士生导师  04-09 西南石油学院研究生院副院长、常务副院长、院长  09-12 西南石油大学党委常委、副校长 12--至今,赵金洲为西南石油大学校长。

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康康是逗逼

西南石油大学学报投稿外审后定稿会定位会之后分配编辑,编辑审理室里面还没消息,咱们老师是他们没有时间,忙的没有时间,前辈的老师,那就是编委会成员,他正忙着讲课呢,他正在忙着讲讲课

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  • 西南石油大学学报中心—钟青

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    guodong930 2人参与回答 2024-07-06
  • 西南石油大学学报中心钟青主委

    这个太多了,不是一言半语能说玩的

    青柠果茶 3人参与回答 2024-07-07
  • 西南石油大学学报中心钟青2021年

    不是EI西南石油大学学报 [1000-2634]本刊收录在: 中国科技期刊引证报告(2012年版) 本刊收录在: 中文核心期刊要目总览(200

    stella59444 3人参与回答 2024-07-05
  • 西南石油大学学报中心钟青教授2021年

    复试时间是2021年3月27日。西南石油大学MEM教育中心将于3月27日进行2021年研招第一批次复试(第一志愿考生),详情请见QQ和土木工程与测绘学院官网通知

    凯利的心窝 3人参与回答 2024-07-04
  • 西南石油大学学报中心

    石油与天然气软科学经济学与管理学社会学政治学与法学文学高等教育管理书评其他 主管单位:西南石油大学主办单位:西南石油大学主编:朱世宏ISSN:1674-5094

    游客56742389 2人参与回答 2024-07-05