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端木青烟
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美丽依然张

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液相色谱法测定猪和牛脂肪中孕酮残留量 下载带有 Google 工具栏的 Firefox, 上网冲浪更惬意 作者; 姜维,方晓明,唐毅锋,庞国芳 【摘要】 目的 建立脂肪中醋酸美仑孕酮、醋酸甲地孕酮和醋酸氯地孕酮残留量的测定方法。方法 色谱柱:Kromasil C18(250mm×6mm,5μm);流动相:乙腈-水(65:35);流速:0ml/min;柱温:35℃;检测波长:292nm;进样量:40μl。结果 样品的室内加标平均回收率为7%~8%,室内相对标准偏差为5%~0%,室间加标平均回收率为4%~0%,室间相对标准偏差7%~1%,定量测定低限(LOQ)为10μg/kg。结论 本方法简便,准确,可用于脂肪中醋酸美仑孕酮、醋酸甲地孕酮和醋酸氯地孕酮残留含量的测定。 【关键词】 高效液相色谱法;脂肪;醋酸美仑孕酮;醋酸甲地孕酮;醋酸氯地孕酮 Determination of progestones in fat of beef and pork by HPLC 【Abstract】 Objective To establish the determination method of melengestrol acetate,chlormadinone acetate and megestrol acetate in fat of beef and Methods Chromatographic separation was carried out on a C18column(250mm×6mm,5μm)and acetonitrile-water (65:35) as the mobile The flow rate was 0ml/min; the column temperature was 35℃; the detection wavelength was 292nm; the injection volume was 40μResults The intra-laboratory average recoveries ranged from 7%~8% and RSD of 5%~0%The inter-laboratory average recoveries added to standard ranged from 4%~0% and RSD of 7%~1%The lowest limit of quantitation (LOQ) is 10μg/Conclusion The method is simple and It is suitable for the determination of melengestrol acetate,chlormadinone acetate and megestrol acetate in fat of beef and 【Key words】 HPLC; fat; melengestrol acetate; chlormadinone acetate; megestrol acetate 醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮为合成的孕激素类药物,有明显的孕激素和抗雄激素作用,可抑制排卵。孕激素对垂体促性腺激素的释放有一定的抑制作用,动物实验表明有死胎率增加和致畸作用,副作用有:(1)恶心、头晕、倦怠;(2)突破性出血;(3)孕期服用,会增加女性后代的男性化作用。孕激素类药物能增强体内物质沉积和改善生产性能,可以很快产生显著和直接的经济效益,因此,对生产者有很大的吸引力。畜牧业中使用孕激素类药物(非治疗用途)已有很长的历史,但人类长期食用含有激素的肉制食品,即使含量甚微,亦会明显影响机体的激素平衡,而且有致癌危险,对幼儿造成发育异常等危害。因此,开发一种能检测孕酮残留量的方法是十分必要的。 检测孕激素类药物的方法有很多,如液相色谱/质谱法(LC/MS)〔1〕、气相色谱/质谱法(GC/MS)〔2,3〕和液相色谱法〔4~6〕等。本文采用高效液相色谱法对牛和猪脂肪样品中的孕酮进行检测。 1 试剂与仪器 1 试剂 醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮标准品(Sigama公司),乙腈(HPLC级),甲醇(HPLC级),乙酸乙酯(HPLC级),其他试剂为分析纯。水由Milli-Q净化系统(Millipore公司)制得。 (1)标准储备液:1000μg/ml,分别准确称取050g醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮标准品于50ml容量瓶中,用甲醇定容。于4℃保存,可使用一年。 (2)混合中间溶液I:100μg/ml,分别吸取0ml醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮标准储备液于100ml容量瓶中,用甲醇定容。于4℃保存,可使用一年。 (3)混合中间溶液II:0μg/ml,取00ml混合中间溶液I于100ml容量瓶中,用甲醇定容。于4℃保存,可使用半年。 (4)混合标准工作液:分别吸取10、20、40、80、100μl混合中间溶液II添加到980、970、950、910、890μl的乙腈-水(65:35)中,再加入10μl 2%盐酸溶液,混匀,得到浓度为010μg/ml、020μg/ml、040μg/ml、080μg/ml和10μg/ml混合标准工作液,供液相色谱测定,当日使用。 2 仪器 Waters液相色谱系统,510泵体,486紫外-可见光检测器,Emprower pro色谱软件。氮气吹干仪(Organomation Associates,J公司);固相萃取装置(Supelco公司);低温离心机(德国Eppendorf公司);涡旋混匀器(XW-80A型,上海医大仪器厂);CN固相萃取柱(3ml,Waters公司)。 2 测定步骤 1 试样的制备与保存 1 试样的制备 把大约5g的猪或牛脂肪组织切成小块,然后放入底部塞有玻璃棉的漏斗中,放入150ml的烧杯中,将烧杯置于微波炉内。根据所熬制脂肪量,使用最大功率,加热30~60s,如果脂肪没有融化,可在间隔30~60s以后重复加热30~60s,直到有液体脂肪流出,通过漏斗滴入烧杯中。把熬制好的脂肪油放入样品瓶中,密封,并做上标记。 2 样品的保存 把熬制好的脂肪油样品置于-18℃中,冷冻保存。 2 提取 称取熬制好的脂肪油00±01g,置于50ml具塞离心管中,加入5ml乙腈,于60℃水浴中保温3min以使固体脂肪溶化,涡旋振摇1min,在-5℃下离心7min(离心力1160g),吸取上清液至15ml带塞聚丙烯离心管,再在沉淀物中加入5ml乙腈重复提取一次,合并上清液。在合并的乙腈提取液中加入2×2ml正己烷,涡旋振摇1min,于-5℃中离心5min(离心力1160g),弃去正己烷层。乙腈提取液于60℃中用氮气吹干仪吹干,残渣待皂化。 3 皂化 在残渣(2项)中依次加入4ml正己烷、1ml 1mol/L 氢氧化钠溶液和0mol/L氯化镁溶液,于涡旋混匀器上快速混匀10s,在60℃水浴中保温15min,于-5℃中离心5min(离心力1160g),吸取上清液至15ml玻璃试管。在沉淀物中再加入4ml正己烷混匀后,在60℃水浴中加热15min后,在-5℃中离心5min(离心力1160g),合并上清液。于60℃中用氮气吹干仪吹干,用0ml正己烷溶解残渣,待净化。 4 净化 将皂化后的样液(3项)倒入经5ml乙酸乙酯和6ml正己烷预处理过的CN柱中,用2×1ml正己烷润洗玻璃试管,洗液倒入到CN柱中。待样液流过后,依次用5ml正己烷和6ml 5%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗柱子,随后打开真空泵将小柱中液体抽干,保持抽气2min。最后用5ml 20%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱,洗脱液收集于15ml玻璃试管中,于60℃中用氮气吹干仪吹干。残余物用990μl乙腈-水(65:35)涡旋溶解,静止15min后,加入10μl 2%盐酸溶液,混匀,供液相色谱测定。 5 测定 1 液相色谱条件 色谱柱:Kromasil C18柱(250mm×6mm,5μm);预柱:C18柱(5mm×6mm,5μm);流动相:乙腈-水(65:35);流速:0ml/min;柱温:35℃;检测波长:292nm;进样量:40μl。 2 液相色谱测定 根据样液中3种孕酮的含量情况,选定浓度相近的标准工作液,标准工作液和样液中3种孕酮的响应值均应在仪器检测的线性范围内。标准工作液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下,标准品的色谱图见图1。 图1 醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮的色谱图(100ng/ml)1-醋酸甲地孕酮,2-醋酸氯地孕酮,3-醋酸美仑孕酮 液相色谱法测定猪和牛脂肪中孕酮残留量 来自: 免费论文网 3 结果与讨论 1 线性范围 醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮浓度在010~10μg/ml范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系,其相关系数(γ2)均大于998。 2 回收率、精密度和定量检测限 本实验以2种脂肪(牛脂肪和猪脂肪)作为样本。取适量标准品加入到0g样品中,使添加量相当于10、20和50μg/kg,每个添加水平各取24份试样(每种脂肪各12份)。图2为空白脂肪样品和添加样品(10μg/kg)的色谱图。表1为醋酸美仑孕酮,醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮外标法测得的室内回收率和精确度。表2为8家实验室的室间回收率和精确度结果。根据回收率试验,能可靠测得的最低浓度确定定量检测限(LOQ),LOQ为10μg/kg,满足残留限量的检测要求。 (A) (B) (C) (D) 图2 空白脂肪样品和添加样品(10g/kg)的色谱图A:牛脂肪空白样;B:猪脂肪空白样;C:牛脂肪添加样;D:猪脂肪添加样 表1 室内回收率和精确度的结果 (每一添加量,n=24) 表2 8家实验室室间回收率和精确度的结果 (每一添加量,n=32) 【参考文献】 1 Hooijerink H,van Bennekom EO,Nielen MWFScreening for gestagens in kidney fat using accelerated solvent extraction and liquid chromatography-electrospray tandem mass Anal Chim Acta,2003,483(1-2): 51- 2 Neidert EE,Gedir RG,Milward LJ,et Determination and qualitative confirmation of melengestrol acetate residues in beef fat by electron-capture gas chromatography and gas-chromatographic chemical-ionization mass J Agric Food Chem,1990,38(4): 979- 3 Impens S,Courtheyn D,de Wasch K,et Faster analysis of anabolic steroids in kidney fat by downscaling the sample size and using gas chromatography-tandem mass Anal Chim Acta,2003,483(1-2): 269- 4 Gaver RC,Movahhed HS,Farmen RH,et Liquidchromatography procedure for the quantitative analysis of megestrol acetate in human J Pharm Sci,1985,74(6): 664- 5 Overdiek JWPM,Hermens WAJJ,Merkus FWHMDetermination of the serum concentration of spironolactone and its metabolites by high-performance liquid J Chromatogr B,1985,42(2): 279- 6 Campbell HM,Sauve FLiquidchromatographic determination of melengestrol acetate in J AOAC Int,1993,76(6): 1163- 液相色谱法测定猪和牛脂肪中孕酮残留量 来自: 思想汇报网参考资料:sixiang-
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小七的妈妈

动物药学专业的主干课程:动物药理学、药物化学、药物制剂学、药物分析、兽医生物制品学。  动物药学专业的主要课程:英语、计算机、家畜解剖学及组织胚胎学、有机化学分析化学、动物生理学、兽医微生物学、动物免疫学、动物毒理学、制药工艺学、药物制剂学、实验动物学、生化制药学和药事管理与法规、生物统计与实验设计、临床诊断学、动物病理学、中兽药学、兽医学基础等。  动物药学专业的主要实践性教学环节:包括教学实习、生产实习、专业文献综述、毕业论文、专业综合能力训练、科学研究基础训练、社会实践等。  动物药学专业的主要专业实践:药物分析实践、兽药生产实践、动物药理学实践、专业综合能力测试、兽医生物制品学实践、药物制剂及中兽药学实践、毕业实习及毕业论文。

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立志做渔婆

浅谈在《免疫学基础与病原生物学》教学中教书育人 论文关键词:免疫学基础与病原生物学 教书育人 领会 实践 论文摘要:笔者结合近30年的教学经历,谈《免疫学基础与病原生物学》教学中实践教书育人的体会与思考,目的是促进教书育人的实施,保证教书育人的质量。 学校是培养德、智、体、美全面发展人才的阵地。教师是教学活动的主体。教师在传授知识,培养学生创新能力,塑造学生思想品质的过程中,履行教书育人的职责。笔者结合近30年的教学经历,谈《免疫学基础与病原生物学》教学中实践教书育人的体会与思考。 1教书育人是教师的基本职责 《教师法》明确规定: "教师是履行教育教学职责的专业人员,承担教书育人,培养社会主义事业建设者和接班人、提高民族素质的使命。” [1]。教师不仅要传授知识、培养技能,还应帮助学生树立正确的人生观、价值观和世界观,促进学生的全面发展。胡锦涛同志在“全国加强和改进大学生思想政治教育工作会议”上指出:“大学生是国家宝贵的人才资源,是民族的希望、祖国的未来。要使大学生成长为中国特色社会主义事业的合格建设者和可靠接班人,不仅要大力提高他们的科学文化素质,更要大力提高他们的思想政治素质。”[2]。培养有扎实专业理论知识和技能,有良好道德品质和修养的高素质人才是教师的基本职责。 2在教学实践中育人 学校各门课程都具有育人功能,所有教师都负有育人职责。作为《免疫学基础与病原生物学》的专职教师,我们始终寓思想教育于课程教学的各个环节中。 1 寓思想教育于课堂教学中 课堂教学是最基本的教学形式,也是教书育人的主要阵地。教师在认真备课,精心设计课堂教学时,应挖掘教学内容的前瞻性和思想性,结合教学内容恰到好处地进行教书育人。例如:①讲授破伤风棱菌的致病性时,强调农民、工人为民众生存而赤手赤脚劳动时易感染破伤风棱菌(该菌经创伤感染,被铁钉、铁丝等刺伤时极易感染),培养学生对劳动者的情感。②讲授冠状病毒时,介绍抗击非典英雄的感人事迹(中山大学附属第一医院钟南山院士为控制疫情,明确“非典”病原体,日日夜夜战斗在抗击非典的第一线;广东省中医院二沙岛分院急诊科护士叶欣连续护理病人2个多月后因感染而殉职),使学生明确医药工作的严峻性和挑战性,培养学生良好的职业道德和高度的责任感。③讲授结核分枝杆菌的防治原则时,介绍卡介苗的研发过程(卡介苗是法国学者Calmette和Gueriw将一株强毒牛型结核杆菌体外传代230代,经历13年而获得的减毒变异株),培养学生坚韧不拔的毅力和坚持不懈的精神。 2 寓思想教育于课外实践活动中 理论教学与实践活动相结合是完成教学任务的必经之路。教师应该根据学生的爱好和课程教学内容,开展各种课外活动,促进学生全面发展。例如:①根据疾病流行情况,组织研讨小组。在“甲型H1N1”流感、“禽流感”等流行期,指导学生从学科现代研究成果与中医药学知识中寻找防治措施,撰写读书笔记,培养学生的责任感与献身于中医药防治传染病的决心。②安排学生参加科研、教研活动,激发学生的学习兴趣,培养其分析问题和解决问题的能力。在笔者主持的国家自然基金课题、国家“863”专项子课题等课题的实施过程中,均有本科生参加。③指导学生进行研究性和创新性学习,培养其勇于创新,勇于攀登的精神。近2年笔者先后指导学生撰写4份大学研究性学习和创新性实验计划项目申请书, 2份立项实施。   4 寓思想教育于严格管理中 教书育人必须坚持严格管理的原则。教师以良好的教学态度、言行和仪表给学生以楷模示范作用的同时,应及时发现学生的不良行为及其思想根源,正确引导和教育学生,使其养成健康向上的学习、生活习惯和行为规范。笔者在近30年的教学中,始终保持一丝不苟、严谨求是、顽强拼搏的工作作风;教学中严格要求学生,不护短、不回避、敢于正面教育学生。例如:①实验课中要求学生独立思考,规范操作;实验前预习实验指导,根据原理整理实验步骤;实验后按要求整理实验室。②课堂上要求学生衣着整洁,行为规范,不无故缺席,不无故打闹。 3 寓思想教育于热情关爱中 和谐融洽的师生关系是教师传授知识,交流情感和教书育人的基础。教师应平等、真诚地与学生沟通,关心他(她)们的思想、学习、生活,培养学生的真心、爱心与诚心。例如:①课堂上教师把自己的手机号码和Email地址告诉学生,并承诺:“有问必答,有求必应”。②课后深入学生中,针对就业、专业以及人生观等问题与学生进行深层次交流,解除他(她)们的忧虑,鼓励其自强自立,奋发向上。

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