撰写文献综述步骤:1、搜索相关文献 在开始搜索文献之前,需要一个明确定义的主题。如果正在写论文或研究论文的文献综述部分,搜索与之相关的研究问题和问题。如果是以独立作业的形式写一篇文献综述,必须选择一个要点,并提出一个中心问题来指导的搜索。2、评价来源 可能无法完全阅读关于这个主题的所有文章,所以必须评估哪些文章与自己的问题最相关。确保使用的来源是可靠的,并确保阅读了自己所研究领域的任何里程碑式的研究和主要理论。可以找到一篇关于谷歌学术的文章,查看被引用了多少次,高引用数意味着这篇文章在该领域有影响力,当然应该被包括在自己的文献综述中。3、识别主题、辩论和差距 组织文献综述的论点和结构,需要理解所阅读的资料之间的联系和关系。根据阅读和笔记,帮助制定文献综述的结构,并展示自己的研究将如何对现有知识做出贡献。4、概述结构 有各种方法来组织文献综述的主体。在开始写作之前,应该对自己的策略有一个大致的了解。根据文献综述的长度,可以结合这些策略。5、写文献综述 文献综述应该有介绍、主体和结论,每篇文章中包含什么内容取决于文献综述的目标。当写完并修改完文献综述后,不要忘记在提交之前进行校对。
文献综述是对论文选题研究现状的梳理,但并不仅仅是把文献进行简单的堆砌与罗列,而是需要在总结梳理别人研究的同时,对已有的研究做出评价,也就是说有述有评,这也是为什么文献综述也叫做文献述评的原因。
神经,白血病
如果可以的话,我有兴趣和您共同研究
胚胎干细胞:来自胚胎的、自然存在的全能干细胞。iPS:非干细胞通过人工诱导方式获得的干细胞。
金仁桃 章孝荣( 安徽农业大学畜牧水产学院 合肥230036 ) �� 自Evans和Kaufman(1981)从延迟着床的胚胎中分离出小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells, ES细胞)以来,ES细胞一直备受人们的关注��〔1〕�。1998年,由基隆公司资助的汤姆森研究小组在《科学》杂志上发表了关于人的ES细胞建立等一系列工作之后,基隆公司的股票更是狂升了6倍;1999年、2000年,干细胞研究两度被美国《科学》杂志推举为21世纪最重要的研究领域;1999年,美国《科学》杂志还将干细胞研究评为当年世界十大科学成就之首。由此足以显示干细胞的魅力,而干细胞之所以如此吸引人们的注意,主要是因为干细胞是一种全能性的细胞,可以自发分化形成多细胞结构,即胚胎小体(embryonic body,EB)。EB含外胚层、内胚层、中胚层三个胚层,胚胎小体继续分化可以形成多种细胞类型,包括血细胞、内皮细胞、肌细胞及神经元等。另外ES细胞在动物克隆生产、转基因动物生产、疾病研究模型及药物生产等诸多方面有着诱人的前景。本文主要就ES细胞在克隆动物生产的应用加以阐述。 �1 ES细胞克隆的理论依据 � ES细胞是从早期胚胎内细胞团(inner cell mass, ICM)和附植后原始生殖细胞(Primordial germ cells, PGCs)分离出来的一种细胞,它具有全能性(totipotenty)或多能性(pluripotency),可以发育为任何一种组织或器官的前体细胞,再由该前体细胞发育成功能细胞。正常的ES细胞可分化为两个子代干细胞,也可以分化一个子代干细胞和一个功能细胞。 这种分化是由干细胞内源性调控(主要是受干细胞内结构蛋白和多肽因子调控)和外源性调控(主要是由周围组织细胞及细胞外基质等调控)所影响。而最近Amato Giaccia 发现氧含量操纵干细胞的分化,为人们进一步利用干细胞提供了有益的提示。另一个重要发现就是Andrew E Wurmser等发现成熟组织的干细胞仅仅是通过与现存细胞融合而形成其他组织,而非制造新细胞,那么对成熟组织的干细胞利用,将趋于更加谨慎��〔2〕�。这也更加提升了ES细胞的作用。 �ES细胞另外一个特点是它像正常的体细胞一样可以在体外进行增殖、克隆、冷冻、保存而保持不分化。这样就可以为人们提供大量的可利用的ES细胞。如每只实验动物一次可提供5000~6500个PGCs,然后在体外可培养成类ES细胞。现在人们可将ES细胞体外培养传至40~60代而不分化,而这样大量的细胞就为我们利用它奠定了基础。 �ES细胞具有可操作性。在体外人们可以对其进行遗传操作选择,如转基因、基因打靶、配合基因诱捕等一系列技术,再结合核移植技术,生产出人们所希望的动物。 �2 ES细胞克隆的可行性 � 克隆技术的原理是将供体细胞核移入去核的卵母细胞中,通过激活使其重新编程发育,从而产生新个体。目前体细胞克隆相对于ES细胞来说,存在有两个问题:一是体细胞在体外培养易变异。为避免这一缺点,目前较多使用新分离或传代较少的细胞。二是关于选用何部位的细胞。目前人们已使用了乳腺细胞、卵丘细胞、输卵管细胞、皮肤成纤维细胞、子宫上皮细胞、肌肉细胞、支持细胞、肝脏细胞、耳成纤维细胞、初乳中乳腺上皮细胞等。但到目前为止,还没有发现何种体细胞是最适合于核移植的,所用作核移植的细胞有的来自于胎儿,一般是成纤维细胞,也有来源于成体动物的。这主要是因为虽然从理论上讲,机体中的每一个细胞都是从受精卵分裂分化而来,而在机体内通过半保留复制方式,DNA信息被完整的传递下来,但从一个受精卵到机体的亿万个细胞,有些细胞的个别基因可能发生不可逆的丢失或重排,使用这样的细胞作核供体,就无法保证信息的完整性,这也可能是目前细胞克隆中普遍存在的克隆效率低,出生后的死亡或异常的原因之一。ES细胞的核移植虽然也同样需要在去核的卵细胞内重新编程,但是相对于体细胞克隆效率低、妊娠期间易流产来说,ES细胞的克隆效率要高得多,而且ES细胞的重新编程要容易得多。这也正如人们所假设的目前存活的克隆个体所用的供体核大多是源于动物组织的成体干细胞的核而非最终分化的细胞的核〔3〕�。 �随着对ES细胞研究的深入,人们已经在多种动物得到了ES细胞核移植的后代。Teruhiko Wakayama等采用长期传代(30代以上)的小鼠ES细胞克隆出了31只小鼠,其中14只存活〔4〕�; Campbell (1996、1995)分别将绵羊、山羊的类ES注射入去核卵母细胞,获重构胚,经核移植有活羊出生��〔5〕�。Michelle Sims和N.L First(1993)将培养6~101d牛的ICM细胞核移植到去核卵母细胞,卵裂率为70%,囊胚率为24%,经胚胎移植有13头妊娠,出生了4头牛犊��〔6〕�; Stice(1996)将牛的类ES细胞进行核移植,得到重构胚并移入受体牛子宫,发育至45天��〔7〕�;Cibelli利用转基因技术得到生殖系嵌合的牛;Shim(1997)和Piedrahita(1998),利用猪的PGCs建立多能干细胞系,并得到嵌合体猪。 �3 ES细胞克隆的意义 � ES细胞的核移植最基本的意义就在于,如果通过核移植能够产生完整的后代,而且具有和亲代一样的遗传特性,那么它就恰恰证实了ES细胞是具有全能性的一种细胞。ES细胞克隆和体细胞克隆一样,通过得到的大量具有亲代一样遗传特性的供体细胞,再利用核移植技术,可以提高优秀个体的繁殖效率,迅速扩充优秀个体的种群,为畜牧生产作出极大的贡献。 对于珍稀品种或濒临灭绝的物种来说,该项技术提供了一种可以挽救珍稀或濒危物种的机会。利用ES细胞水平上的基因操作相对于受精卵水平上的转基因更加容易,可以得出人们所需求的转基因动物,然后再运用核移植技术,即可得到大量的具有此基因表达的个体,同时这也是创造新物种的绝好机会。由于ES细胞具有自发融合的性质,由此可在细胞水平上操作, 完成新物种的创造,而这种新物种可能是自然交配无法得到的。人们曾将牛、绵羊及人的GH基因先后导入小鼠基因组,得到的转基因小鼠在快速生长期生长速度为对照组的4倍。另外,利用ES细胞核移植还可以一次得到大量同质的后代,为生物学研究提供了很好的模型。 4 目前存在的问题 � 由于ES细胞的发现至今也只有20多年的历史,因此人们对它的了解有限,限制了对它的利用,目前就干细胞的核移植来说,主要存在以下问题: �1 核移植技术本身还有许多理论有待完善,目前核移植的效率还很低,而对于像重构胚的发育与着床,核质互作与协调等理论还需要人们作进一步的深入研究。 �2 ES细胞建系的技术还不成熟。目前广泛使用的饲养层是小鼠成纤维细胞无限系(STO)或小鼠胚胎成纤维细胞(Primary Mouse Embryo Firbroblasts, PMEF)制备而成,主要是利用其细胞分泌的生长因子FGF和抑制细胞分化的因子LIF共同作用,保持干细胞在体外克隆而不分化,然后加入一些其它的物质。即便如此,目前其建系的效率仍不是很高,特别在国内,能够得到大家畜的类ES的都不是很多,而且得到传代次数较少。人们目前尝试了使用其它的培养基,如大鼠成纤维细胞条件培养基、山羊输卵管上皮培养基、绵羊输卵管上皮培养基、绵羊子宫上皮培养基、山羊子宫上皮培养基、牛的颗粒细胞培养基、牛子宫成纤维细胞培养基、胎牛的睾丸、肾、肝成纤维细胞培养基。Meinecke Tillmann(1996)发现胎牛的成纤维细胞对绵羊的ICM和ES细胞增殖有利。而Piedrahitat等采用猪胎儿成纤维细胞和上皮细胞作为饲养层,结果失败。Strojek等(1990)认为,初步培养囊胚时,使用猪子宫成纤维细胞饲养层可以促进囊胚的贴壁和ICM克隆的形成。此时若用STO作饲养层,尽管猪囊胚可以附着在STO上,但ICM不增殖,但以后的传代只需要STO进行。可见对于饲养层的选择,目前仍有待人们的进一步发现。对于ES细胞的建系,人们还发现,ES细胞必须保持一定的浓度,这是因为ES细胞能够从培养基中摄取营养的同时,也要向培养基中排出自己的分泌和代谢产物和其它一些物质,这些分泌物中,有促进细胞生长的物质,有人就称之为促克隆生长物质。 �ES细胞应用范围是很广的,对于核移植的应用仅是其一部分。例如,利用ES细胞的全能性,进行定向诱导分化,再在细胞水平上进行药物的测试,可以极大提高药物的检测进度;利用ES细胞可建立人类遗传病研究的动物模型等。可以说,对于干细胞的研究方兴未艾。 � 参考文献 �〔1〕Evans M J, Kaufman M H Establishment in Culture of Pluripotential Cells from mouse embryos〔J〕 Nature, 1981, 292(9): 154~156 �〔2〕Andrew E Wurmser, Fred HG Cell fusion causes confusion〔J〕 Nature, 2002,416,485~491 �〔3〕Konrad Hochedlinger, Rudolf J Monoclonal mice generated by nuclear transfer from mature B and T doner cells〔J〕 Nature, 2002,415,1035~1038 �〔4〕Wakayama T, Rodriguez I, Perry AC, et Mice cloned from embryonic stem cells〔J〕 Proc Natl Acad Sci USA, 1990,96(26):14984~14989 �〔5〕CKHS, Mc whiir,J, RWA, et Sheep cloned by nuclear transfer from a cuctured cell line〔J〕 Natrue,1996,38(7):64~66 �〔6〕Sims MM, FirsA NI Production of fetuses from totipotent cultured bovine inner cell mass cells〔J〕 Theriogenology, 1993,39:313 �〔7〕Stice SL, strolchonko NSPluriopotent bovine embryonic cell lines directed embryonic development following nuclear transfer biology of Reproduction〔J〕 Theriogenology, 1996,54:100~110
淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的
研究的目的要说明问题是如何发现的,即该研究的研究背景是什么,是根据什么、受什么启发而搞这项研究。也要说明该选题在理论上的创新性,来突出自己选题与各个主流观点的差异。而研究的意义,要对所研究问题的实际用处有所了解从生活实际出发进行解读。
The English papers cell biologyNature Publishing Group (NPG) and the European Molecular Biology Organization (EMBO) are pleased to announce the launch of an exciting new online-only journal, Molecular Systems B The quality of the journal is guaranteed by the editorial and advisory boards, consisting of leading researchers in the field of systems biology, together with the commitment to scientific excellence and the professionalism of EMBO and NPG Molecular Systems Biology covers all aspects of the rapidly growing and interdisciplinary field of systems biology at the molecular level, and will attract and help shape the highest quality research in the evolving areas of genomics, proteomics, metabolomics, bioinformatics, microbial systems, and the integration of cell signaling and regulatory The journal will work together with the systems biology community to establish guidelines, standards and metrics for global complex
主要应用于工业生产等!
研究的目的要说明问题是如何发现的,即该研究的研究背景是什么,是根据什么、受什么启发而搞这项研究。也要说明该选题在理论上的创新性,来突出自己选题与各个主流观点的差异。而研究的意义,要对所研究问题的实际用处有所了解从生活实际出发进行解读。
淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的淡淡的
神经,白血病
1995年以来我国造血干细胞工程与相关的生物学领域的研究发展迅速。有关造血干/祖细胞基因表达的研究,上海国家人类基因组研究中心陈竺、陈赛娟等为正常和急性白血病人骨髓造血干祖细胞cDNA文库的基因表达建立了一套先进的工作体系。他们在许多白血病细胞系的干/祖细胞中发现了300个新的相关基因。中山大学医学院李树浓、黄绍良等从人的桑葚期胚胎干细胞成功地诱导出造血细胞等。北京输血研究所裴雪涛等从成人和胎儿的骨髓分离出成年源干细胞,又进一步诱导分化为骨、软骨、脂肪和神经原细胞等。他们成功地构建了胎儿和成人间充质干细胞cDNA扣除文库,获得了胎儿和成人间充质干细胞的差异表达基因及在胎儿特异表达基因。中国医学科学院天津血液学研究所、国家血液学重点实验室赵春华等证实从胚胎胰腺、骨髓和肝脏中都可以分离出人间充质干细胞,又证明G-CSF可以使输注的间充质干细胞在体内促造血重建。北京基础医学研究所毛宁等的实验不支持间充质干细胞可以“横向分化“。最近他们发现小鼠胚胎干细胞的体外分化重现了胚胎早期造血发生的生物学程序以及Smad5基因调控在胚胎造血发生中的必要性和多样性,又表明其上游配体TGF-beta家族分子在胚胎发生中的作用和特点。本文针对干细胞可塑性研究作了评论。国际上曾风靡一时的“横向分化“有关的实验都没有用完全纯化的胚层干细胞或组织干细胞来证实。然而,完全纯的胚层或组织定向的干细胞克隆是无法制备的。成年或胎儿全身各类组织中混有一些定向某胚层的或某组织的干细胞,甚至还混有桑葚胚干细胞。它们是胚胎发育过程的每个阶段中停止参与胚胎发育而残留下来的。它们在体内处于静止期,寿命长,长期存留在成人的各种组织中。各胚层和组织干细胞混杂在一起,它们都没有特异的形态、表型和功能,无法分离纯化,甚至和成人组织细胞也很难分开。它们在体外实验适当的条件诱导下可分化为各种组织细胞。在那些想证明组织干细胞“横向分化“的实验中,都无法排除上述可能。本专论指出,只有桑葚胚干细胞是全能的胚胎干细胞,具有向各个胚层分化的潜能,即具有全能分化的可塑 性。当它发育成为各个胚层的或各种组织的干细胞时,它的分化潜能只限于本胚层或本组织,不能向其它胚层其它组织分化。本专论又指出间充质干细胞的制备过程很长,经过许多次的换代。等到出现许多分化抗原标志时,已经是后代的各种不同的成熟间充质细胞了。当然,它们的存在可证实最初培养的是间充质干细胞。大量扩增后所获得的集落主要是各种成熟的间充质细胞,其中也包含一些未来参与分化的间充质干细胞和中胚层干细胞。间充质干细胞和造血干细胞都是来自中胚层。然而它们都是培养中的贴壁幼儿,无法区分也无法分离它们。因此在实验中无法排除所制备的间充质干细胞样品中,绝对没有中胚层或其它胚层干细胞的存在。至今,完全纯化的间充质干细胞是不可能制备的。所以,很可能从间充质干细胞体外诱导出各类不同的,甚至内、外胚层的组织细胞,切不可轻率地推率为“横向分化“。临床支持造血干/祖细胞移植的,主要是成熟而有调控功能的各种间充质细胞。总之,“横向分化“等的推论缺乏实验证据,在生物自然界和人类疾病史中都找不到佐证。想要推翻经无数科学家实践充分证明了的细胞遗传学的最基本原理,必须在生物自然界找到非常充足的科学证据唐佩弦 军事医学科学院基础医学研究所 我国造血干细胞基础研究的新进展兼论干细胞可塑性